流式細胞儀（一、原理）

最近和朋友聊到

流式細胞儀

，

很實用的技術！

流式細胞儀

用於測量細胞特徵，包括細胞大小、細胞數量、細胞週期等。

可

提供單個細胞的高度特異性資訊。

要

確保每個細胞都得到獨立分析

，

實現高效有效

的

流式細胞分析最關鍵要求

：

樣品為單細胞懸浮液。

流式細胞儀的三個主要

系統

是流體學、光學和電子學系統

。

流體

學

系統負責將樣品從樣品管轉移到流動池。一旦透過流動池（並透過鐳射束），樣品將被分選出來（在細胞分選儀中）或移到廢液中。

光學系統的元件包括激發光源、透鏡和濾光片以及用於產生光電流的檢測系統。

電子系統是

對

來自檢測器的光電流經過數字化、處理和儲存，以用於後續分析。

加樣

樣品

為

單細胞懸浮液中的熒游標記

細胞，

細胞懸浮在一種被稱為鞘液的生理緩衝液。流體系統（管道、泵和閥）將初始樣品懸浮液排列成單列細胞流（圖

2

），並使細胞透過流式細胞儀以進行分析。

鐳射檢測點

細胞與鐳射發生相互作用的地方稱為鐳射檢測點。當鐳射束照射到單個細胞時，

光束同

細胞內的物理結構

相碰撞

，導致光線散射。這種光散射可被測量，並且與相對細胞大小和細胞內的結構相關。

根據採

集光的位置相對於鐳射路徑的角度

不同，散射光分

為前向角散射（

FSC

）和側角散射（

SSC

）

，

同時，鐳射器的光激發與細胞相關的所有熒光團，

激發熒光

。流式細胞儀檢測器收集並

處理

所有這些光。透過鐳射檢測點之後，流體系統會將不需要的細胞輸送到廢液桶。

應用

蛋白質表達

-

遍及所有細胞，包括細胞核內

蛋白質轉譯後修飾

-

包括剪下和磷酸化蛋白質

RNA -

包括

IncRNA

、

miRNA

和

mRNA

轉錄物

細胞健康狀態

-

從存活率到晚期凋亡或程式化細胞死亡

細胞週期狀態

-

是評估細胞處於

G0/G1

期、

S

期、

G2

期或多倍體狀態的強大工具，包括分析細胞凋亡和活化

鑑定和表徵異質樣本中的不同細胞亞群

-

包括區分中樞效應記憶細胞和耗竭

T

細胞或調節性

T

細胞

接下來，

分享一些流式細胞儀的

流體學、光學、電學的設計及選型！