相比之下，如果要新增嘌呤殘基，Mn2是首選的輔因子

進行下一步驟之前，透過凝膠電泳檢查樣品的消化情況，以確保沒有環狀質粒DNA分子殘留。

2。加入2μL 0。5mmo/L EDTA。

3。使用商品化試劑盒純化線性載體，將DNA重懸於50μL H2O中。ddT殘基新增到平末端質粒DNA的3’端末端脫氧核糖核苷酸轉移酶催化dNTPs新增到DNA分子的5‘端。

DNA聚合酶如大腸桿菌DNA聚合酶的Klenow片段和Taq具有往DNA底物新增單個核苷酸的能力，而末端轉移酶可以在適當的條件下催化數百個核苷酸的新增。然而，透過使用鏈終止底物雙脫氧胸苷三磷酸（ ddTTP）作為底物，3’延伸的長度被限定為-一個單核苷酸COzarelli et al。1969）。

以G ： C鹼基對作為末端的平末端DNA是較差的底物，而富含A： T的平末端則比較寬鬆，並且修飾起來更迅速和同步。末端轉移酶對離子的要求很奇怪。

它被許多反應緩衝液常有的陽離子所抑制，包括銨、氯離子和磷酸根離子（更多詳情，見酶的發現者Fred Bollum於1974年合著的一篇 綜述）。

大多數末端轉移酶催化的反應在二甲胂酸（二甲基砷酸）緩衝液中進行（Kato et al。1967），雖然100mmolL的Tris-乙酸（pH7。2） 幾乎是一-樣好。使用dTTP或其類似物ddTTP作為底物的反應在Co2*的存在下進行。

相比之下，如果要新增嘌呤殘基，Mn2是首選的輔因子。除了它的怪癖，末端轉移酶在平末端DNA的3‘端新增核苷酸比Taq DNA聚合酶更有效。