新版細胞毒性檢查法——瓊脂擴散法

免疫瓊脂擴散用什麼檢測

細胞毒性是化學物質（藥物）作用於細胞基本結構和/或生理過程，如細胞膜或細胞骨架結構，細胞的新陳代謝過程，細胞組分或產物的合成、降解或釋放，離子調控及細胞分裂等過程，導致細胞存活、增殖和/或功能的紊亂，所引發的不良反應。

高密度聚乙烯瓶

供試品製備

將樣品用純化水沖洗乾淨（根據實際情況需要），用濾紙吸乾。

若用供試品液進行試驗，將製備的供試品液附著到生物多性吸收性的基質（例如超細硼矽玻璃纖維濾紙）上，支撐面積不少於100個單位的圓形供試品。

陰性對照製備

取生物毒性參比物質，例如：高密度聚乙烯。按照供試品製備項下的規定進行。

陽性對照製備

取生物毒性陽性參比物質，例如含二乙基二硫代氨基甲酸鋅的聚氨酯（ZDEC）。按照供試品之輩項下的規定進行。可採用10%二甲基亞碸（DMSO）溶液，附著到生物惰性吸收性的基質上。

檢查法

取細胞懸浮液（1X105個/ml）7ml，均勻分散至直徑60mm的培養皿中。置於含（5±1）%CO2氣體的西跑培養箱中培養24h至匯合單層細泡，棄去培養皿中培養基，將融化瓊脂冷卻至48度左右與含20%血清的2倍新鮮哺乳動物細胞培養基混合，使瓊脂最終質量濃度不大於2%，在每隻培養皿內加入新制備的含瓊脂培養基（要足夠博以利於可瀝濾物的擴散）。

防潮醫藥包裝

含瓊脂培養基凝固後，可適當的的染色方法染色，將供試品、陰性對照、陰性對照小心地放在培養皿的固化瓊脂層表面。

每個供試品、陰性對照、。陽性對照試樣間儘量保持合適的距離並遠離培養皿壁，每一培養皿中放置不超過3個試樣，每個試樣至少設定2個平行，置（37±1）度含（5±1）%CO2的細胞培養箱中至少培養（24±2）h。培養箱宜保持適當的溫度。用顯微鏡觀察每個供試品、陰性對照、陽性對照試樣反應區域。用活體染料如中性紅可有助於檢測細胞毒性。

結果評價

進行細泡毒性評價和分級，對照下表陰性對照為0級（無毒）、陽性對照不小於3級（中度毒），則細胞培養試驗系統有效。檢測提取液時，供試品液的反應區域應減去介質對照的反應區域，再進行毒性分級。供試品和或供試品液細胞毒性大於2級（輕度毒）以上時，則判為合格。