快速完成細胞消融丨如何提取動物組織DNA？

動物肝臟DNA提取可以：（1）用於法醫學鑑定；（2）診斷和系統發育研究；（3）用於進一步的聚合酶鏈式反應（PCR）以獲得DNA，本次中洪君為你帶來的是三種方法中助力你一臂之力！

（請耐心花2分鐘閱讀完本文，建議推薦給小夥伴一起學）

1

濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離。

1）用1M 氯化鈉提取，得到的DNP粘液；

2） 與含有少量辛醇的氯仿一起搖盪，使乳化；

3） 離心除去蛋白質，此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位於上層水相中；

4） 用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來。

2

陰離子去汙劑法

用SDS或二甲苯酸鈉等去汙劑使蛋白質變性， 可以直接從生物材料中提取DNA。

由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合， 而陰離子去汙劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去汙劑提取DNA。

（實拍圖）

3

苯酚抽提法

材料：

冷凍或新鮮豬肝組織

裝置：

EP管、微量取液器（20μl， 200μl，1000μl）， 臺式高速離心機， 渦旋振盪器；

操作步驟

1）樣品預處理

取新鮮動物組織25-50 mg（組織量不宜過多，否則容易導致裂解不完全而堵塞離心柱），組織剪碎或者切成小塊放入研缽研磨搗碎。

2）加入600 μl 的Lysis Buffer，顛倒充分混勻。如需消化RNA，可加入20 μl RNase A，顛倒混勻，室溫放置5 min。

3）加入10 μl Proteinase K，混勻。56℃水浴45 min-1 h，其間顛倒混勻數次直到看到組織完全裂解，裂解完全的標準為液體變得清亮及粘稠。（此步驟可以過夜處理）

4）12，000 rpm 離心10 min，將上清轉入新的離心管中，加入800 μl 無水乙醇，混勻。

5）將液體轉入離心柱（一次加不完，可分次轉入），12，000 rpm 離心1min，棄廢液。

6） 加入700 μl Wash buffer A（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12，000 rpm 離心30 s -1 min，棄廢液。

7）加入700 μl Wash buffer B（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）， 12，000 rpm 離心30 s -1 min，棄廢液。

8）加入500 μl Wash buffer B，12，000 rpm 離心30 s-1 min，棄廢液。

9）再次12，000 rpm 離心2 min，將離心柱置於新的離心管中，並開啟離心柱蓋，於室溫或37℃恆溫箱放置5~10 min，直至無明顯乙醇味。

10）在矽基質膜中央加入50-200 μl TE buffer（事先預熱55-65℃），置於室溫2-5 min，12，000rpm 離心30 s。

11）離心得到的溶液再次加入離心柱中，室溫放置2min， 12，000 rpm 離心2 min。所得的溶液為純化後的基因組DNA。

轉自：中洪博元醫學實驗幫

如何快速完成所有的操作呢？

，時長

00：32

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