BE生物分析—樣品分析中穩定性評估
血漿裡有什麼酶對藥物造成不穩定
主要原則
確保樣品收集和儲存的所有條件都應保證分析物的穩定性。如果有適當的穩定措施（如降低溫度、避光、新增穩定劑、使用適當的收集和儲存容器），應在方法開發過程中確定。方法驗證過程中的穩定性評估應僅用於確認最佳化實驗條件的適用性。
影響因素：
光不穩定：氨氯地平、喜樹鹼、葉酸、甲鈷胺、氯丙嗪、異丙嗪
酶不穩定：嗎替麥考酚酯、阿司匹林、坎地沙坦酯片、氯吡格雷
熱不穩定： 磺胺嘧、螺內酯、辛伐他汀
氧不穩定：半胱胺、肼屈嗪、
PH不穩定：醯基葡萄糖醛苷酸氯吡格雷
多電荷狀態：多肽藥物，溶液PH，有機相及比例、新增劑種類及比例
其它：在樣品中分佈不均勻、溶劑揮發、吸附、析出
穩定性加速實驗可用於方法開發，但不應該用於方法驗證
生物基質應該適用於模擬試驗樣品，推薦使用足夠新鮮的基質，保持酶活性
表1 對受管制生物分析穩定性評估的關鍵建議的總結
在證明穩定性的特定條件下，貯藏期的持續時間必須覆蓋，因此至少等於在這種條件下貯藏研究樣品的最長時間。必要時，在一種方法的生命週期內，可以增加穩定性評估或延長貯存期，以滿足不斷擴大的需要。理想情況下，穩定性結果在第一次研究樣本獲得之前就可以得到，因為在不知道適當的儲存和穩定條件的情況下進行研究會有產生無效濃度結果的風險。
穩定性驗證主要內容
全血穩定性、基質樣品的長期與短期穩定性、溶液的長期與短期穩定性、製備後樣品穩定性、處理液再進樣穩定性
不必評估在標準實踐中不會遇到條件下的穩定性
共識：穩定性結論
低、高兩個濃度水平
單一時間點足夠多的重複樣品（≥3）
最佳實踐：參考值
新鮮配製的樣品：在評估穩定性當天配製，不冷凍，並使用必要的措施（例如避光或放於冰上）
最佳實踐：生物基質中穩定性
為了獲得可靠的結果，必須使生物基質中的分析物在
儲存和分析的不同階段
都有足夠的穩定性
分析前融化的樣品在實驗臺上放置
樣品重複地融化和冷凍
取樣和分析之間的冷凍儲存，持續時間差別很大
科學上更重要的是覆蓋最長儲存時間以及該分析應用的冷凍融化迴圈次數，而不是簡單遵循規定的條件，因為這些條件在實際中可能不會遇到
最佳實踐：儲備液穩定性
不僅分析物可能分解，而且因為重複地長期使用溶液，可能導致溶劑揮發，引起濃度變化
對於不同濃度的溶液，推薦對實際使用的最低和最高濃度評估·穩定性，吸附效應可能依賴於濃度
必須考察不同條件的穩定性，包括長期儲存（冷藏或冷凍） ，也包括每天使用（環境條件）
通常不必單獨評估內標溶液的穩定性
最佳實踐：提取物穩定性
對於使用某種形式提取樣品的分析方法，必須評估分析物在提取物中的穩定性，包括處理後穩定性和儀器中存放穩定性
應該對提取物將經歷的所有條件，考察提取物穩定性
不必評估提取物在放入自動進樣器之前的存放穩定性，因為校正標樣和QC樣品在相同條件下存放
相對穩定性定義為，一段時間內相對於新鮮提取的校正曲線濃度恆定
最佳實踐：提取物穩定性
在血漿或血清中的分析物在取樣階段，以全血放置一段時間，此期間的穩定性資訊是必需的
證據表明，全血中的穩定性與血漿或血清中的穩定性一般。沒有什麼差別，但特定的結構除外，如N-氧化物和異羥肟酸
測量全血穩定性有兩種做法： （1）在除去細胞物質後，分析血漿或血清； （2）直接分析全血
對於明顯分佈到細胞內的分析物，配製的全血樣品應該孵化足夠長時間，以達到平衡，且在穩定性測試前加溫到37℃
最佳實踐：內源性化合物穩定性
難點：通常缺乏不含分析物的基質，不容易獲得真正的t = 0新鮮參比樣品
穩定性樣品：應該是真正的生物基質，含有真正的分析物
校正標樣：一般為替代基質或替代分析物
穩定性低濃度樣品：篩查多批真正基質，並選擇一個樣品
穩定性高濃度樣品：往該低濃度樣品被新增分析物配製獲得，或者在篩查多批試驗樣品基質後，選擇其中一個適當的高濃度樣品
因為確切的標示濃度一般未知，所以穩定性通常表達為相對於t = 0值的變化
最佳實踐：偏離基質穩定性
通常，從未給藥的健康個體獲得基質，用於穩定性評估
偏離的生物基質是指其組成不同於常規對照基質的其他基質形式，例如溶血血漿、來自患者群體的基質、含有其他藥物的基質等
分析物接觸血紅蛋白或溶血細胞中其他組分的不穩定性，來自健康人和患者的基質之間酶活性的顯著差異，以及其他藥物或製劑輔料對樣品性質的顯著影響
如果一個特定試驗的基質與常規對照基質明顯偏離，並有理由認為這種偏離將對分析物的穩定性有影響，則應考慮在這種偏離基質中進行穩定性評估
穩定性結
果失敗後的處理
總結
應該完全理解分析物和生物基質的性質，以及全部取樣、運輸、儲存和分析條件的影響，才能確定適當的措施確保穩定性
根據分析物的特殊性質、生物基質的特點或樣品採集或儲存中的異常情況，可能需要額外的實驗
應該總是基於可靠的科學理由，確定取樣和儲存所需的條件以及必要的確證實驗，以證明在這些條件下穩定性沒有受到影響，而不僅僅依賴標準操作流程
參考文獻與資料
Merbel N V D ， SavoieN ， Yadav M ， et al。 Stability： Recommendation for Best Practices andHarmonization from the Global Bioanalysis Consortium Harmonization Team［J］。 TheAAPS Journal， 2014， 16（3）：392-399。
網址：
http：//www。ncbi。nlm。nih。gov/pubmed/24550081/
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