過氧化物酶（POD）活性檢測試劑盒（可見分光光度法）
過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒（可見分光光度法）
注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
產品貨號：
BA1105
產品規格：
50
管
/48
樣
產品簡介：
POD
（
EC 1。11。1。7
）廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
POD
催化
H
2
O
2
氧化特定底物，在
470nm
有特徵光吸收。
產品內容：
提取液：液體
60mL×1
瓶，
4℃
儲存；
試劑一：液體
60mL×1
瓶，
4℃
儲存；
試劑二：液體
0。33mL×2
瓶，
4℃
儲存；用時每瓶加入
5mL
試劑一；用不完的試劑
4℃
儲存一週；
試劑三：液體
10mL×1
瓶，
4℃
儲存。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、
1mL
玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1
、 細菌、細胞或組織樣品的製備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（
10
4
個）：提取液體積（
mL
）為
500~1000
：
1
的比例（建議
500
萬細菌或細胞加入
1mL
提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率
20
％或
200W
，超聲
3s
，間隔
10s
，重複
30
次）；
8000g 4℃
離心
10min
， 取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（
g
）：提取液體積
（mL）
為
1
：
5~10
的比例（建議稱取約
0。1g
組織，加入
1mL
提取液），進行冰浴勻漿。
8000g 4℃
離心
10min
，取上清，置冰上待測。
2
、 血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟：
1
、分光光度計預熱
30min
以上，調節波長至
470nm
，蒸餾水調零。
2
、測定前將試劑一、二和三
37℃
（哺乳動物）或
25℃
（其它物種）放置
10min
。
3
、樣本測定表
在
1mL
玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻並計時，記錄
470nm
下
30s
時的吸光值
A1
和
1min30s
後的吸光值
A2
。計算
ΔA
＝
A2-A1
。
三、POD 活性計算：
1
、血清（漿）
POD
活性
單位定義：每
mL
血清（漿）在每
mL
反應體系中每分鐘
A470
變化
0。01
為一個酶活力單位。
計算公式：
POD
（
U/mL
）
=ΔA×V
反總
÷V
樣
÷0。01÷T =7133×ΔA
2
、組織、細菌或細胞
POD
活性
（1）
按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每
mg
組織蛋白在每
mL
反應體系中每分鐘
A470
變化
0。01
為一個酶活力單位。
POD
（
U/mg prot
）＝
ΔA×V
反總
÷
（
V
樣
×Cpr
）
÷0。01÷T =7133×ΔA÷Cpr
（2）
按樣本鮮重計算
單位定義：每
g
組織在每
mL
反應體系中每分鐘
A470
變化
0。01
為一個酶活力單位。
POD
（
U/g
鮮重）＝
ΔA×V
反總
÷（W×V
樣
÷V
樣總
）÷0。01÷T =7133×ΔA÷W
（3）
按細菌或細胞數量計算
單位定義：每
1
萬個細菌或細胞在每
mL
反應體系中每分鐘
A470
變化
0。01
為一個酶
活力單位。
POD
（
U/10
4
cell
）＝
ΔA×V
反總
÷（500×V
樣
÷V
樣總
）÷0。01÷T =14。27×ΔA
V
反總：反應體系總體積，
1。07mL
；
V
樣：加入樣本體積，
0。015mL
；
V
樣總：加入提取液體積，
1mL
；
T
：反應時間，
1min
；
Cpr
：樣本蛋白質濃度，
mg/mL
；
W
：樣本鮮重，
g
；
500
：細菌或細胞總數，
500
萬。
注意事項：
1
、若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在
37℃
（哺乳動物）或
25℃
（其它物種）放置
10min
以上，測定時加入
15L
樣本和
1055L
混合液測定。
2
、如果
ΔA
小於
0。005
，可將反應時間延長到
5min
。如果
ΔA
大於
0。5
，可將樣本用提取液稀釋後測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。
想了解更多精彩內容，快來關注尚寶生物
